Protocole de TP un peu flou

[invite599597bb]

Bonjour

J'ai un tp de biochimie la semaine prochaine ,je suis en train de le preparer j'ai compris le but qui est de tracer des spectres d'absorption de 3 acides aminés pour etablir leur coefficient
d'absorption molaire

ensuite, on doit "enregistrer" le spectre d'absorption molaire d'une solution contenant du lysozyme
et on devra etablir son coefficient d'absorption molaire puis la concentration de la solution

Dans le protocole on nous demande de préparer les solutions d'acide aminés suivantes

10ml d'une solution de Phe (10mM) dans le tampon phosphate 10mM
A partir de cette solution stock,preparer 5ml d'une solution de Phe 2mM dans le tampon phosphate

Pour les 2 autres acides aminés c'est a peu pres le meme protocole mais je voudrais d'abord comprendre ce qu'il faut faire
Je n'ai jamais eu affaire à un protocole aussi flou
Dois-je trouver le volume de tampon a mettre ?

merci
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[invite853321bf]

Bonjour,
tu dois calculer le facteur de dilution pour préparer la solution demandée

[invite599597bb]

Bonjour,

Donc préparer une telle solution : 10ml d'une solution de Phe (10mM) dans le tampon phosphate 10mM
A partir de cette solution stock,preparer 5ml d'une solution de Phe 2mM dans le tampon phosphate

Reviendrai à : Prélever 2ml de la solution de Phe, puis l'introduire dans une fiole jaugée de 10ml et de compléter le volume jusqu'au trait de jauge avec la solution de tampon phosphate

Cest cela ?

[Flyingbike]

oui, sauf qu'on te demande 5mL. il faut donc prélever 1 mL et compléter a 5

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite599597bb]

D'accord !

la notion " a partir de cette solution stock" m'a perturbé
je pensais qu'il fallais mélanger la solution de Phe avec celle du tampon et apres réaliser la dilution


mais c'est bon je saurais faire pour la suite
merci

[invite599597bb]

Bonjour,
j'ai une autre question concernant ce TP, mais sur la seconde partie

Nous devions excité une solution de fluorescéine et enregistrer le spectre d'excitation
puis enregistrer les spectres d'émission de cette molécule diluée dans différent pH.
Plus le pH augmente et plus l'intensité de la fluorescence augmente.

Il y a une questionque je n'arrive pas à traiter, il s'agit, de déterminer le pKa de la fluorescéine,
or,la seule formule que je connaisse liant le pKa , est pH=pka +log(Base/Acide)et il y a trop d'inconnu


je souhaiterais avoir une piste

[inviteb3a6feac]

Bonjour,

Quel est le problème justement auquel vous désirez que l'on réponde. Effectivement comme vous les dites, vous avez la formule liant pH et pka, c'est donc tout bon...

Cordialement
nowell