Bonjour,
J'ai un problème de taille et je cherche de nouvelles pistes auxquelles je n’ai pas pensé pour résoudre mon problème.
Je transfecte des cellules rétroviral avec un plasmide adapté auquel j’ai intégré mon gène d’intérêt ainsi qu’un gène de résistance au G418.
Le problème c’est que je n'arrive pas a obtenir l'integration de mon transgène dans le génome de mes cellules.
Suite à une transfection réalisé grâce à de la lipofectamine j'ai une expression transitoire de mon gène d'intérêt, cependant pendant la phase de sélection avec le G418 de façons général toutes les cellules meurent et je ne peut pas récupéré de clone stables.
J’ai toutefois réussi a récupérer 2 clones survivant à la pression de sélection suites a l’une de mes transfections cependant lorsque je dose ma molécule d’intérêt pour l’un des clones je n’obtiens rien et pour le second la quantité est vraiment négligeable..
Quelqu’un aurait ils une idée ?
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