Bonjour bonjour,
Je suis en licence de Biochimie et l'autre jour en TP j'ai réalisé un dosage afin de déterminer le nombre de fonctions thiols de l'ovalbumine. Pour ce faire j'ai :
- réaliser une cinétique de dénaturation avec différents temps de contact de l'urée sur la protéine (tube contenant : 0.5mL de DNTB à 0.01M + 2.5mL d'urée à 9M + 2mL de solution mère d'ovalbumine à 5.10-5M) Grâce aux absorbances obtenues j'ai tracé la courbe Absorbance = f(temps) et je pense pouvoir déterminer l'absorbance de dénaturation totale (0.664)
-j'ai également réaliser une détermination du coefficient d'extinction molaire du NTB grâce à une gamme d'étalonnage : je trouve E=13670mol-1.L.cm-1
Arrive enfin la fameuse question : "déterminer le nombre de fonctions thiols accessibles au réctifs d'Ellman par molécule d'ovalbumine native, après dénaturation"
Et là, je ne vois pas trop comment faire, je calcule la concentration en NTB grâce à l'absorbance (0.664) et au coeff. d'extinction molaire (C=Abs/E = 4.86.10-5M) mais je ne sais pas si cette concentration est pour 5mL ou pour 0.5mL... Je pense qu'il faut calculer le nombre de mol de NTB (qui sera égal au nombre de mol de fonction -SH car le réactif réagit mole à mole) puis faire le rapport de ce nombre de mole sur celui de l'ovalbumine
Le problème c'est que je ne sais pas quel volume utiliser et si je dois prendre en compte ou non des dilutions. J'ai trouvé pleins de résultats différents (0.605; 24.2; 4.11 etc...)
Donc si vous avez des conseils à me donner ou une piste pour le calcul je vous remercie d'avance !

Toucan-toco


Rien n'est plus proche du vrai que le faux